接下來喆圖小編就來給大家講講關(guān)于凍存的細胞如何做前處理及培養(yǎng)。
首先當(dāng)我們收到包裝箱后,立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快,以避免升溫。不要將細胞儲存在-60℃的低溫冰箱中,這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。
接下來是培養(yǎng)細胞的關(guān)鍵:
(1) 將一管細胞從液氮罐中取出,注意保護手和眼睛。
(2) 將凍存管快速的放入37℃的電熱恒溫水浴鍋中,輕輕握住并旋轉(zhuǎn),直到管內(nèi)物體*融化。
(3) 將凍存管立即從電熱恒溫水浴鍋中拿出,擦干,轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。
(4) 用70%的酒精沖洗凍存管,然后擦去多余酒精。
(5) 打開蓋子,注意手指不要碰到里面的螺紋(注意,由于凍存管有負壓,開蓋時可能會有少量溢出,這是正?,F(xiàn)象)。
(6) 用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細胞推薦的接種密度為每平方厘米6000個細胞。
(7) 蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子,輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。
(8) 將培養(yǎng)瓶放入CO2培養(yǎng)箱中37℃恒溫培養(yǎng)。
(9) 放入CO2培養(yǎng)箱后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基,以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。
以上內(nèi)容僅供參考,一些細胞類型像神經(jīng)細胞,神經(jīng)膠質(zhì)細胞和一些生長緩慢的上皮細胞,不推薦擴增培養(yǎng)和再次凍存。其它的細胞類型像成纖維細胞、星形細胞、腎系膜細胞、星形膠質(zhì)細胞等等,可以擴增培養(yǎng)和再次凍存,如需了解詳情請聯(lián)系喆圖客服!
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